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ELISA試劑盒標本收集辦法
更新時間:2017-01-17   點擊次數(shù):1144次

ELISA試劑盒標本收集保留不妥致細菌污染,菌體中也許富含內(nèi)源性HRP,會發(fā)生假陽性反響;標本在冰箱中保留時刻過長致使血清IgG聚合,易使間接法的實驗本底加深。因而,標本宜在新鮮時檢查。
假如血液未開端凝結或凝結不*時就強行離心分離血清,此刻的血清中仍留有些纖維蛋白原,在ELISA測定過程中能夠構成肉眼可見的纖維蛋白塊,易形成假陽性結果。
反復凍融血清會使抗體效價下跌,所以測抗體的血清標本如需保留做多次檢查,宜少數(shù)分裝凍存。
加樣
假如樣品稀釋液少加或血清多加,都會致使本底增高。關于間接法來說,受上述兩個因素影響更大。
因為血清中受檢的特異性IgG只*IgG中的一小有些。IgG的吸附性很強,非特異性IgG可直接吸附到固相載體上,有時也可吸附到包被抗原的外表。
這些非特異性的IgG均能夠和酶標二抗發(fā)作反響而形成較高陰性本底或假陽性。假如參加的血清過多,高于規(guī)則的稀釋倍數(shù),很容易形成高值陰性。反之,形成假陰性。
ELISA試劑盒實驗在必定溫度下的反響時刻并不是反響的結尾,溫育時刻過短、溫度過低,易致顯色不全;溫育時刻過長、溫度過高,易致非特異性緊附于反響孔周圍,難以清潔*,發(fā)生陰性高值或假陽性反響。
要嚴厲按規(guī)則的溫度和溫育時刻進行。
假如參加的酶物過多或加在較高的孔壁上或孔口,也會致使本底添加或假陽性。
水浴箱門,嚴厲控制水浴的溫度為37±0.5。同時,微孔板不可堆疊放置,以確保傳熱均勻,各板的溫度都能敏捷到達平衡。
當標本收集保留不妥發(fā)生溶血時,紅細胞中的血紅蛋白釋放到血清中,血紅蛋白具有過氧化物酶的性質(zhì),其通過吸附或“PP效應"(蛋白質(zhì)間相互吸附的景象)后,可催化A、B液顯色而形成假陽性。
因為試劑盒一般設定的反響溫度為37度,在這個溫度下溫育必定時刻,蒸騰的水分會許多,關于全部反響系統(tǒng)來講,各種反響物的濃度會不斷地添加,這么必會致使反響zui終的值添加。
ELISA試劑盒溫育時應貼上封板膠。

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