技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > ELISA實驗中樣本處理具體七要素分析
ELISA實驗中樣本處理具體七要素分析
更新時間:2018-11-28   點擊次數(shù):816次

ELISA是以免疫學反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。本文章基免生物將講訴elisa試劑盒實驗中所需樣本處理及需求。

ELISA試劑盒所需要樣本處理及要求七要素分析:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右  (2000-3000轉(zhuǎn)/分)去除顆粒。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清   。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。


上?;馍锾嵝言诓杉瘶颖緯r應(yīng)注意:
       收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。

上海晶抗生物工程有限公司

上海晶抗生物工程有限公司

地址:上海市金山工業(yè)區(qū)亭衛(wèi)公路6558號9幢2441室

版權(quán)所有:上海晶抗生物工程有限公司  備案號:滬ICP備16026504號-5  總訪問量:532341  站點地圖  技術(shù)支持:智慧城市網(wǎng)  管理登陸