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酶聯(lián)免疫雙抗夾心法檢測(cè)攻略
更新時(shí)間:2018-12-12   點(diǎn)擊次數(shù):1551次

 酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法有間接法,阻斷法,競(jìng)爭(zhēng)法,夾心法等。夾心法中,包被的抗體與酶標(biāo)抗體,假如是單抗,理論是不能用一樣的,不外商品化的單抗有可能是混合單抗,識(shí)別不同的表位的抗體混在一起,這樣就又可以用一樣的。在今天的技術(shù)下載內(nèi)容中,是基免為您分享酶聯(lián)免疫雙抗夾心法檢測(cè)攻略:

一、標(biāo)本因素不可忽略

    1.振蕩提取

    將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中,振蕩,使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組織內(nèi)部,提取待測(cè)組分。

    ① 振蕩方式:振蕩器上進(jìn)行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。

    ② 在組織樣本中加入有機(jī)溶劑之間提取時(shí),應(yīng)邊加邊振蕩,防止組織凝結(jié)成團(tuán),不利于提取。

    3.在用有機(jī)溶劑提取過(guò)程中,如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,解決的方法有:①用細(xì)頭輕輕的攪拌,破壞乳化后,再重復(fù)離心。②再加入適量的提取劑,重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。

    4.濃縮

    由于凈化過(guò)程中引入的溶劑,可能會(huì)降低待測(cè)組分的濃度或者不適宜直接分析,需要去除全部有機(jī)溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮?dú)庀麓蹈?,再用?fù)溶液溶解干燥殘留物。

    濃縮方式:氮?dú)獯蹈沙s、壓縮空氣吹干除雜。

    注意:

    ① 在吹干樣本之前,用甲醇清洗針頭,防止雜質(zhì)干擾。

    ② 在吹樣本時(shí),針頭應(yīng)在液面上空,避免與樣本接觸,防止產(chǎn)生交叉污染。

    ③ 樣本吹干后應(yīng)立即取下,避免吹的時(shí)間過(guò)長(zhǎng),影響zui終檢測(cè)結(jié)果。

    ④ 不同的藥物,吹干后樣本的保質(zhì)期不同,提倡待樣本回到室溫后立即復(fù)溶。

    5.凈化

    經(jīng)過(guò)提取的待測(cè)組分中通常含有一些會(huì)干擾試劑盒中抗原抗體反應(yīng)的雜質(zhì)或者是含有與待測(cè)物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。將待測(cè)組分與雜質(zhì)分離的過(guò)程,我們稱(chēng)為試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的zui常見(jiàn)的凈化是液液分配法。

二、試劑盒的靈敏度也是關(guān)鍵之一

    一般說(shuō)來(lái),如果待測(cè)樣本中目標(biāo)蛋白的濃度比較高,則對(duì)靈敏度要求相對(duì)小一些。如果待測(cè)樣本中目標(biāo)蛋白的濃度比較低,則必須考慮靈敏度的問(wèn)題。試劑盒曲線上的zui小濃度是比較準(zhǔn)確的,低于這個(gè)值因?yàn)榕c曲線是個(gè)“S"型結(jié)構(gòu)有關(guān),所以結(jié)果是有偏差的,是一種估算。再加上實(shí)驗(yàn)誤差,所以達(dá)不到理想的效果。建議選擇試劑盒時(shí),應(yīng)該看曲線上zui小的濃度值,而不是試劑盒上寫(xiě)的靈敏度。

    相對(duì)靈敏度=真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性+假陰性)×100%

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