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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測(cè)定標(biāo)本分化
更新時(shí)間:2020-02-20   點(diǎn)擊次數(shù):859次

(1)標(biāo)本溶血 

    
由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,均可因紅細(xì)胞損壞溶解時(shí)釋放出很多具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過(guò)氧化物酶為符號(hào)的ELISA測(cè)定中,會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色,攪擾測(cè)定成果。為戰(zhàn)勝上述攪擾效果,標(biāo)本收集時(shí)有必要注意避免溶血。
    
(2)標(biāo)本受細(xì)菌污染 
    
因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶,因而,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而攪擾測(cè)定成果。
    
(3)標(biāo)本保存不妥
    
在冰箱中保存過(guò)久的標(biāo)本,血清中IgG可聚組成多聚體、AFP可構(gòu)成二聚體,在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深、乃至構(gòu)成假陽(yáng)性;標(biāo)本放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(如一天以上),有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱,亦可出現(xiàn)假陰性。

為戰(zhàn)勝上述攪擾,ELISA測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮收集;如不能當(dāng)即測(cè)定,5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充沛混合后再測(cè)定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,不行激烈振蕩。

(4)標(biāo)本凝集不全
    
在沒(méi)有促凝劑和抗凝劑存在的情況下,正常血液收集后1/2~2h開(kāi)端凝結(jié),18~24h*凝結(jié)。臨床查驗(yàn)工作中,有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè),常在血液還未開(kāi)端凝結(jié)時(shí)即強(qiáng)行離心別離血清,此刻的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測(cè)定過(guò)程中能夠構(gòu)成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊,易構(gòu)成假陽(yáng)性成果;

這類(lèi)情況于次日復(fù)查時(shí)因血凝已*,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復(fù)查成果變?yōu)殛幮?。為避免上述攪擾效果,處理的辦法是血液標(biāo)本收集后有必要使其充沛凝結(jié)后再別離血清,或標(biāo)本收集時(shí)用帶別離膠的采血管或于采血管中參加適當(dāng)?shù)拇倌齽?br />    
(5)標(biāo)本管中增加物質(zhì)的影響
    
抗凝劑(如肝素,EDTA)、酶抑制劑(如NaN3可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過(guò)氧化物酶活性)及快速別離血清的別離膠等均對(duì)ELISA測(cè)定有一定攪擾效果。

通過(guò)以上的剖析和總結(jié),臨床查驗(yàn)ELISA測(cè)定中出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性等過(guò)錯(cuò)的成果,掃除ELISA試劑盒要素和操作要素,再有就是從標(biāo)本要素進(jìn)行剖析,并應(yīng)采取相應(yīng)措施掃除攪擾,從而保證檢測(cè)成果的準(zhǔn)確性。

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