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蛋白酶k(Proteinase K)配制、使用方法及作用
更新時間:2022-02-09   點擊次數(shù):7420次

蛋白酶k(Proteinase K)是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解??梢杂糜谙鞣N蛋白。用于各種常見的分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)等相關(guān)實驗,例如基因組DNA抽提、酶的消化去除等。

酶活力,>30U/mg。在37℃,以血紅蛋白為底物,1分鐘內(nèi)可以產(chǎn)生相當(dāng)于1微摩爾酪酸Folin陽性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量,定義為一個單位蛋白酶K酶活力。

在很寬的pH范圍內(nèi)有效,有效的pH范圍為pH4.0-12.5,佳pH范圍為pH7.5-8.0。

蛋白酶K的佳反應(yīng)溫度為65℃,但在65℃或更高的溫度蛋白酶K自身的也非常迅速地降解。很多時候反應(yīng)溫度選擇50-55℃。

在0.2-1%SDS或約10mM尿素存在的情況下,蛋白酶K顯示更高的酶活性。蛋白酶K的常用工作濃度為0.05-1mg/ml,根據(jù)所用緩沖液是否含有SDS、尿素、pH是否適合、溫度是否適合等因素確定具體的工作濃度。

蛋白酶K跟蛋白酶有什么區(qū)別:

蛋白酶K廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué),藥理學(xué)等科研方面.一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關(guān)的蛋白酶,具有很高的比活性.一般儲存在-20°C,避光防潮密閉干燥。

蛋白酶是所有能夠催化分解蛋白質(zhì)的酶類的統(tǒng)稱,而蛋白酶K則是特指一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質(zhì)的降解,比如在提取DNA時溶解DNA的水中就有一定量的蛋白酶K.所以它們不屬于同一個產(chǎn)品。

蛋白酶K配制標準:

20mg/ml蛋白酶K配制標準(proteinase K):將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,輕輕搖動,直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。

蛋白酶K的保存:保存在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融,有效保證12月。

孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時間為15分鐘至48小時;理想孵育時間為2小時。

蛋白酶k(Proteinase K)的作用:

蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增加探針與靶核酸結(jié)合的機會,提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導(dǎo)致組織切片的脫落,細胞核?的消失,從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現(xiàn)的問題,并能達到理想的染色效果。

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