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晶抗生物為您介紹ELISA試劑盒試劑數(shù)據(jù)分析與標(biāo)曲擬合
更新時間:2024-04-08   點擊次數(shù):631次

做完ELISA試劑盒試劑實驗,測完吸光度,數(shù)據(jù)怎么處理?標(biāo)準(zhǔn)曲線不是直線怎么辦?小晶整理了ELISA試劑盒數(shù)據(jù)處理相關(guān)知識,希望對您有幫助。

ELISA試劑盒

一、ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線分析步驟

1.標(biāo)曲和樣本孔的每個孔490nmOD值減去1230nm(或970nm)的OD值;

2.再將獲得的標(biāo)曲和樣本孔數(shù)據(jù)分別減去空白孔Blank的OD值;

3.以標(biāo)曲的濃度為橫坐標(biāo),以這算出的OD值為縱坐標(biāo),擬合標(biāo)曲(選擇R2值大于0.的比較好的擬合方式,必要時可以刪除個別差異較大的標(biāo)曲點進行擬合);

4.計算樣本值,將樣本減去空白孔的OD值復(fù)制,選軟件中的“粘貼”,得到的X值再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)就是終的濃度值。

二、ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合方程

1.直線回歸:直線回歸是基本、簡單的回歸分析方法,將所有的測試點擬合為一條直線,其擬合函數(shù)方程式為:y=a+bx。一般實際實驗中線性的情況下直線回歸可以獲得較為理想的R2值,如果直線擬合不理想,可以考慮三次曲線、logistic曲線(四參數(shù))等。

2.logistic曲線(四參數(shù))擬合回歸方程:競爭法和夾心法都可以用到。它要求X值不能小于0(因為指數(shù)是實數(shù),故有此要求)。在很多情況下它都可以擬合ELISA試劑盒的反應(yīng)曲線,所以它也成了ELISA試劑盒試劑中應(yīng)用廣的模型之一。

注:曲線擬合方法雖多,要根據(jù)不同類型ELISA試劑盒本身的特點,選擇適合的曲線擬合模型,才能得到合理的實驗結(jié)果。一般情況下,需要綜合考慮標(biāo)準(zhǔn)曲線的趨勢走向以及R2值的大小以及樣本落值情況。

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