更新時間:2024-06-11
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ELISA試劑盒的操作詳情:
1. 使用前,將所有試劑充分混勻,不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),每個標準品和空白孔建議做復孔,每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內,立即加入50ul的生物素標記的抗體,蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,重復此操作4次,如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,重復此操作4次,如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘,避免光照。
8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9. 在933nm波長處測定各孔的OD值。
該試劑盒組成包括:96孔酶標板、酶標二抗、四環(huán)素抗體工作液、四環(huán)素6個濃度標準品溶液,底物顯色液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復溶液、高濃度標準品溶液、蓋板膜、自封袋、說明書和質檢報告,上海晶抗生物科技有限公司歡迎新老客戶前來訂購。
人熱休克蛋白60Hsp-60ELISA試劑盒
雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml,在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過液,次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘,(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時,然后洗滌,(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml,37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示;也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
◇ 洗滌方法:
1. 自動洗板機:每孔加入洗滌液350μl,注入與吸出間隔60秒,洗板5次。
2. 手工洗板:甩盡孔內液體,在潔凈的吸水紙上拍干,每孔加洗滌液350μl,浸泡1-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體,在厚的吸水紙上拍干,洗板5次。
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